サービスについて

概要

Gibco AAV-MAX Helper Free AAV Production Systemを用いて、目的のアデノ随伴ウイルス(Adeno associated virus, AAV)を産生します。
実験用途に応じて、Thermo Scientific POROS CaptureSelect AAVX Affinity Resinを用いたアフィニティ精製や各種分析も可能です。作業はすべて国内ラボで実施します。

特長

  • Gibco AAV-MAX Helper Free AAV Production Systemを利用し、細胞を高密度で浮遊培養することで、高titerのAAV産生を実現します。
  • Thermo Scientific POROS CaptureSelect AAVX Affinity Resinによる高純度の精製および濃縮が可能です。
  • 複数のAAVセロタイプへの対応が可能です。
  • 分析項目のオプションとして、Applied Biosystems TaqMan Real-Time PCR法によるtiter測定(VG:vector genomes)やSDS-PAGE分析による精製度評価も提供しています。

ウイルスに挿入したい遺伝子をお持ちでない場合は、人工遺伝子合成(Thermo Scientific GeneArt))および、クローニングサービスをご利用いただくことが可能です。

国内ラボで試験を行いますので、迅速で丁寧な対応が可能です。お問い合わせから納品まで短期間でお届けすることができます。ぜひご相談ください。

試験フローチャート

AAV産生(納期4週間)
AAVパッケージング用のプラスミド3種類(Transfer Plasmid, Rep/Cap Plasmid, Helper Plasmid)をご提供いただき、プラスミド精製、AAV産生、クルードライセ―トの回収を行います。

-試験に必要な量のプラスミドをご提供いただける場合、納期2週間ほど短縮されます。

オプション:産生したAAVの精製・濃縮(納期1週間~)
  • アフィニティ精製
  • バッファー交換、濃縮、分注凍結

オプション:分析(納期1週間~)
  • TaqMan Real-Time PCRによるtiter測定(目的遺伝子特異的TaqManプローブキットをご提供いただく必要がありますがサーモフィッシャーサイエンティフィック社から候補配列のご提示も可能です)
  • SDS-PAGE


125 mL シェーカーフラスコを用いて30 mLスケールで 6種類のセロタイプのAAV産生試験を行いました 。6種類のセロタイプすべてにおいて高Titerのウイルス産生がされていることがデータで示されました。


GFPを搭載するAAV1クルードライセ―トから、POROS CaptureSelect AAVX Affinity Resinによるアフィニティ精製、および限外ろ過濃縮を行いました。
得られた精製AAV溶液のSDS-PAGEおよび293 FT Cellへの感染試験を行った結果、AAVキャプシドタンパク質(VP1、VP2、VP3)が高純度で確認され(fig.2)、高効率の遺伝子導入・発現が確認されました。(fig.3

ご提供いただくもの

  • AAV発現用プラスミド3種類(Transfer Plasmid, Rep/Cap Plasmid, Helper Plasmid)
  • 目的遺伝子特異的TaqManプローブキット(titer測定ご希望の場合)
  • 配列情報、参考文献、参考資料など

納品物

  • AAVクルードライセートまたは精製AAV溶液(冷凍)。

  • 参考Titerおよび容量
    AAVクルードライセ―ト 1 x 10^11 Vg/mL 30 mL
    精製AAV溶液(濃縮) 1 x 10^12-13 Vg/mL 200 µL

    上記はサーモフィッシャーサイエンティフィック社での6種類のセロタイプ(AAV1-6)における30 mLスケール試験結果を基にした参考値です。
    • 試験報告書
    • 遺伝子組換え体譲渡書

ご注文に関して

参考価格・納期

スケールおよび価格は一例です。ご相談の上、お見積りさせていただきます。
また納期は必要量のプラスミドをご提供いただく場合、2週間短縮されます。
titer測定をご要望の場合は、TaqMan Real-Time PCRによるtiter(VG/mL)測定(目的遺伝子特異的TaqManプローブキットをご提供いただく必要があります。候補配列のご提示が可能です。お見積もり時にご相談ください。)

30 mLスケール

作業内容ターゲット数納期
12348
価格(税抜)(ターゲットあたりの単価)
AAV産生¥210,000¥140,000¥120,000¥105,000¥95,0004週間
AAV産生~精製・濃縮¥345,000¥250,000¥220,000¥195,000¥175,0005週間
AAV産生~精製・濃縮 titer測定¥375,000¥280,000¥250,000¥225,000¥205,0006週間

3mLスケール

作業内容ターゲット数納期
48
価格(税抜)(ターゲットあたりの単価)
AAV産生¥75,000¥60,0004週間
AAV産生~精製・濃縮¥125,000¥100,0005週間
AAV産生~精製・濃縮 titer測定¥150,000¥120,0006週間

オプションサービス

作業内容価格(税抜)納期
SDS-PAGE¥60,0001種間

関連サイト