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カルナバイオサイエンス / AssayQuant Technologies(アッセイクオント テクノロジーズ)

カイネティクス測定アッセイサービス

PhosphoSens 技術を使ったアッセイサービスをご提供致します。


カテゴリ
タンパク質工学 > スクリーニング > アミノ酸・酵素・タンパク質の作製・スクリーニング
タンパク質工学 > プロテオミクス(タンパク質解析) > キナーゼアッセイ
質量分析・試料分析 > 化学物質検査 > キナーゼ活性阻害測定

サービスについて

概要

カルナバイオサイエンスではAssayQuant Technologiest社(米国、MA)との協業にてPhosphoSens 技術を使ったアッセイサービスをご提供致します。PhosphoSens を用いれば、酵素アッセイのみならず、細胞や組織ライセートのサンプルについてもシンプルかつパワフルなリアルタイムカイネティクス測定が可能です。

PhosphoSens 技術とは?
Mg2+をキレーティングすることで蛍光を発する(Chelation-enhanced fluorescence:CHEF)Sulfonamido-Oxine(Sox)をペプチドなどの基質に結合させ、キナーゼによる基質のリン酸化を蛍光強度の増加として経時的に検出することを可能にした技術がPhosphoSens です。この技術を用いることにより、ホモジニアスなアッセイ系で簡便にダイレクトなカイネティックス測定が可能となりました。お客様の創薬における構造活性相関(SAR)の解析やMechanism of Action(MOA)探索にお役立てください!

アッセイ原理(fig.1
PhosphoSens ではSoxにシステイン残基を導入した改良型CSoxセンサーを使用。CSoxを結合させた基質がキナーゼ、ATP、Mg2+の存在下でリン酸化されるとMg2+がリン酸基とCSoxにキレーティングされることにより複合体が形成される。ここに励起光を照射することで蛍光を発する。この蛍光強度の変化を経時的に検出することで、基質のリン酸化状態の変化をリアルタイムでモニターすることが出来る。
(本技術はマサチューセッツ工科大学(MIT)にて開発、MITが保持する特許を独占的にAssayQuant社が実施)
PhosphoSens RED
ハイスループットな試験をご希望なら、エンドポイントでの測定が可能なPhosphosens REDがお勧めです。
反応系にEuropiumを添加することで、Mgの配位を置換して360nmの励起で616~620nmの赤色域の蛍光を発するcomplexが形成されます。complexが発する赤色光を時間分解蛍光測定(100~200μ seconds delay)で検出することにより、青~緑色領域で強くみられる化合物の自家蛍光などのバックグラウンドの蛍光を排除し、エンドポイントでの測定を可能にしました。(fig.2
Phosphosens REDでは通常のPhosphosens カイネティクス測定と全く同一の基質を用いるため、HTSからSARやMOAの解析までシームレスに実施可能です。

特長

  • リン酸化状態の変化をリアルタイムにモニターできるため、様々なパラメーター解析が可能
    →Km、Vmax、kcat、IC50、Kinact/KI、Ki、Kon、Koff、Residence Time 等々ご要望に合わせて測定頂けます
  • 多様なマイクロプレートリーダーで測定可能
    Excitation;360nm、Emission;485nmの測定が可能な装置ならOK
  • 96-well、384-well、1536-wellの多様なプレートリクエストに対応可能

PhosphoSens を使った4つのサービス

  1. キナーゼアッセイキット
  2. フォスファターゼアッセイキット
  3. カイネティクス解析サービス(詳細はお問い合わせください)
  4. 基質探索サービス PhosphoSens
    アッセイ構築に必要な基質をお探しですか?AssayQuant社提供の基質探索サービスをご利用頂ければ、ジェネリックな基質から選択制の高い基質までお客様のアッセイ用途に合わせた最適な基質をシステマチックに探索しお届けいたします。キナーゼ蛋白質のみならず細胞および組織ライセートを用いての評価アッセイの構築にもお役立て頂けます。

    [サービスシステム]
    探索はマイルストーン形式で、費用は各ステップごとのお支払いとなります。ステップの浅い段階で最適基質が見つかった場合はそれ以降の費用は発生致しません。まずはお客様が希望される探索ターゲットについてご相談下さい。

    キナーゼターゲットの場合
    Milestone 1 4-8 wks AssayQuant社の膨大なCSox基質ライブラリーを探索スクリーニング
    Milestone 2 4-8 wks Milestone1の結果から探索された候補基質のアミノ酸配列をひとつひとつ置換することにより
    最適な配列を探索
    Milestone 3 4-8 wks Milestone 2で探索された配列の中から効果を示したアミノ酸置換を組み合わせて更に最適化
    細胞および組織ライセートを用いたアッセイの場合
    Milestone 4 4-8 wks Milestone 3で探索された基質を更にアミノ酸置換によってライセートを用いたアッセイに最適化
    Milestone 5 4-8 wks Milestone 4の結果を元にて更なる最適化
    システマチックなアップローチでご希望ターゲットの基質を同定、最適化致します。
    EGFRをターゲットとした基質探索サンプル(fig.3

AssayQuant 社について

AssayQuant Technologies社(米国 MT マールボロ)は、数々の主要ライフサイエンス企業で20年以上豊富な経験を積み重ねてきた研究者と、総合的なアプローチを用いて化学と生物学を結び付けることによりタンパク質を構造、機能、設計という様々な側面から研究し続けるMITの教授とのコラボレーションによって創設された革新的なテクノロジー企業です。 http://www.assayquant.com/
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※表示している参考価格は消費税等は含まれておりません。
※受託サービスは、すべて研究目的として作業を行います。その他の目的(医療品・食品の製造・品質管理や医療診断など)には使用しないで下さい。
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※人間への感染性が疑われるサンプルに関しては、お受けできない可能性がございます。
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