概要
ベクタービルダー社の包括的なCRISPR製品とサービスはin vitroまたはin vivoゲノム編集を必要とする実験へ理想的なツールとなります。ベクタービルダー社は、トランスフェクションやトランスダクションに使用する市販の試薬から、複数の納品形態（プラスミド、ウイルス、RNAなど）で提供される高ターゲティング効率をもつカスタムCRISPRベクターまで様々なCRISPR製品群を提供しています。トランスフェクションが難しい細胞に対してCRISPRを実行するために、主要なウイルスタイプ（レンチウイルス、AAV、アデノウイルスなど）へのパッケージングサービスも提供しています。さらに、ベクタービルダー社はノックアウト、遺伝子発現活性化、遺伝子発現抑制、その他のCRISPRスクリーニング用途の高品質CRISPRライブラリー構築を専門としています。ベクタービルダー社が独自に設計し、実用性が確認された全ゲノムデュアルgRNAノックアウトライブラリーは、ヒトとマウス遺伝子の機能スクリーニングへの強力なツールとなります。
特長
- 直感的に扱えるオンラインベクターデザインプラットホームと全ゲノムgRNAデータベースによって簡単で素早いCRISPRのデザインが可能です。
- 豊富なベクターバックボーンとコンポーネントが利用できます。
- 様々な納品形態(CRISPR/Cas9プラスミド, CRISPR/Cas9ウイルス, Cas9 mRNA + gRNA, Cas9-gRNA RNP複合体)を選択できます。
- 多様なCRISPRライブラリー構築オプションを選択できます。
- 信頼性の高い品質、短い作業日数、競争力のある価格。
- 実験計画の設計、データ解析、トラブルシューティングへの強力な技術サポート体制。
製品内容
- カスタムCRISPRベクター
CRISPRゲノム編集は標的細胞内でCas9と標的配列に特異的なgRNAが同時発現している必要があります。ベクタービルダー社の直感的なオンラインベクターデザインプラットホームを利用して、30以上のベクターバックボーン（非ウイルス、ウイルス、トランスポゾン）と無数の組み合わせをもつベクターコンポーネント（プロモーター、Cas9バリアント、蛍光タンパク質、薬剤選択マーカーなど）を選択することによって、様々な方法でCas9と任意のgRNAを発現させることができます。さらに、標準プラスミド、レンチウイルス、AAV、アデノウイルス、piggyBacの各ベクターシステムに対して、Cas9とgRNA共発現用のAll-in-oneシステムとデュアルベクターシステムを用意しています。
ベクタービルダー社の包括的なCRISPRベクターコレクションには、HDRによる標的サイトへの点変異などの配列改変や大きな配列のノックインをおこなう際にDNAテンプレートとして機能する遺伝子ターゲティング用ドナーベクターも含まれています。さらに、ベクタービルダー社は内在性の遺伝子座で標的遺伝子の転写活性化もしくは転写抑制を行う場合に使用する、CRISPRa転写活性化、CRISPRi転写抑制用ベクターも用意しています。CRISPRa用にdCas9-SAMまたはdCas9-SunTagが組み込まれたベクターの設計と作製、CRISPRi用にdCas9-KRABまたはdCas9-KRAB-MeCP2が組み込まれたベクターの設計と作製が可能です。
CRISPRベクターのご注文の際にプラスミドDNA精製サービス、RNA精製サービス、ウイルスパッケージングサービスも追加できます。
- 既製CRISPRベクター
カスタムCRISPR/Cas9ベクター作製に加えて、ベクタービルダー社では既製のCas9ベクター群、コントロール用gRNAベクター、CRISPRa及びCRISPRi用ヘルパーベクターを提供しています。これらの既製ベクターは大腸菌ストックの形状でいつでも発送可能です。プラスミドDNA精製サービス、RNA精製サービス、ウイルスパッケージングサービスも既製ベクターのご注文の際に追加できます。
- CRISPRウイルス
レンチウイルス、AAV、アデノウイルスは哺乳類細胞にCRISPRコンポーネントを導入するさい、頻繁に利用されます。ベクタービルダー社はトランスフェクションが難しい細胞に対しても高効率CRISPRターゲティングを実現可能にする、プレミアム品質のレンチウイルス、AAV、アデノウイルスのパッケージングサービスを提供しています。ベクタービルダー社のウイルスパッケージングは独自の技術や試薬によって大幅に改良されているので、タイター、純度、生存率、再現性の面で優れた結果をもたらします。そのため、ベクタービルダー社のクローニング及びウイルスパッケージングサービスに満足され、繰り返しご注文をいただいているお客様の数は増え続けています。
- Cas9 mRNAとgRNA用のRNA調製
ベクタービルダー社では哺乳類細胞にCRISPRコンポーネントのRNAを導入したい場合に、トランスフェクション対応、マイクロインジェクション対応Cas9 mRNAおよび任意の標的サイトに対するgRNA作製サービスを用意しています。Cas9 mRNAとしてはhCas9ヌクレアーゼとCas9ニッケース(Cas9(D10A)) mRNAが利用可能です。ベクタービルダー社ではCRISPRライブラリーデザイン（CLD）のアルゴリズムを利用して計算した特異性スコアといくつかの経験的なルールを使用して、任意の遺伝子/配列をターゲットとする最適なgRNAを設計します。
- ゲノム編集用ドナーDNA
ベクタービルダー社ではHDRを利用した切断箇所でのDNA配列編集をおこなうためのドナーDNAテンプレートを、ssODNまたは線状化プラスミドからdsDNAとして作製します。点変異導入やDNA配列のノックインなどに利用できます。ssODNは標的配列への小さいタグや制限酵素サイトなどの短DNA配列(60bp以下)の挿入に利用されます。dsDNAは蛍光タンパク質タグや他のレポーターなどの大きな配列(4～5kbまで)のノックインを行うために利用されます。
- CRISPRライブラリー
ベクタービルダー社では様々なCRISPRライブラリー、例えば、遺伝子の機能スクリーニング用のノックアウトライブラリー、非翻訳領域の遺伝子制御機能スクリーニングや遺伝子の機能獲得型スクリーニング用のCRISPRaライブラリー、遺伝子の機能欠失型スクリーニング用のCRISPRiライブラリーなどのカスタム設計及び構築サービスに特化しています。加えて、1細胞スクリーニング用のCRISPRバーコードライブラリーやその他のCRISPRライブラリーの構築にも対応しています。
構築したライブラリーは大腸菌ストック、プラスミドDNAプール、もしくはウイルスにパッケージングされた形状での納品を選択できます。ベクタービルダー社のカスタムライブラリーは次世代シークエンスによって検証され、納品されたライブラリーの検証データの確認も可能です。
カスタムライブラリー構築サービスに加えて、ヒトとマウスの全ゲノムノックアウトスクリーニング用の既製デュアルgRNAレンチウイルスライブラリーも提供しています。デュアルgRNAライブラリーはgRNAペアによって標的遺伝子に大きな配列欠失を導入可能であり、シングルgRNAライブラリーよりも効率的に遺伝子機能欠損変異体を作製できるため、デュアルgRNAライブラリーはシングルgRNAライブラリーよりも強力なノックアウトスクリーニングツールです。ヒトとマウスのデュアルgRNAライブラリーは20048ヒト遺伝子と20493マウス遺伝子を標的とした、即時使用可能な高タイターのレンチウイルスの形状で構築されています。各遺伝子は可能な限り4～6種の異なるgRNAペアによってターゲットとなるように設計されています。
- CRISPRソリューションズ
CRISPRシステムの高い汎用性によって哺乳類細胞での様々なゲノム編集が可能になりました。ベクタービルダー社の分子生物学に精通した技術陣があらゆるCRISPRゲノム編集プロジェクトにおいて、実験設計から試薬の生産までの完全なサポートを行います。以下に記載した一般的なCRISPRプロジェクトのサポート、または新規のCRISPRプロジェクトに協力します。デザインサポートを依頼する に詳細を送っていただければ、ベクタービルダー社からのサービス内容を無料で提案させていただきます。
・点変異の導入
・DNA配列のノックイン
- 小さいタグ配列の挿入 (< 60 bp)
- 大きなDNA配列の挿入 (4～5 kbまで)
・CRISPR遺伝子転写活性化 (CRISPRa)
・CRISPR遺伝子転写不活性化 (CRISPRi)
・CRISPRライブラリー (ノックアウト, CRISPRa, CRISPRi, バーコードなど)
・安定細胞株作製
- Cas9発現細胞株
- iPSCゲノム編集
- がん細胞ゲノム編集
