概要

GenScriptは、CRISPR相同組み換え修復（HDR）を利用した遺伝子ノックインの効果を最大化する、高品質で配列検証済みの1本鎖DNAの提供を開始します。

CRISPRノックイン用HDRテンプレートとして1本鎖DNAを使用する利点

• 高い編集効率
• 低い細胞毒性
• オフターゲット効果の低減
• 正確性の向上
• 初代細胞や幹細胞の編集に最適
• 遺伝子改変動物モデルの作製に最適

特長

• サンガー法シーケンシングによる解析を行い、製品の目的配列が正しいことを保証します。
• 独自の手法で、2本鎖DNAは検出できないレベルに抑え、塩基損傷を最小限に防ぎます。
• 20μgまでの収量増が可能で、様々な実験デザインに対応できます。
• テンプレート配列を製造部で保存するため、同じ配列をより速く安価に再注文できます。
• 16年以上にわたる遺伝子合成サービスで培った経験とノウハウがあります。

CRISPR HDRによる遺伝子ノックインのメカニズム

CRISPR/Cas9テクノロジーは、標的の遺伝子上に適切な2本鎖DNA切断（DSBs）を起こすために広く用いられています。ガイドRNA（gRNA）は標的DNA上のprotospacer adjacent motif（PAM）配列を認識し、Cas9との複合体を形成します。そしてCas9エンドヌクレアーゼ活性によって生じる2本鎖切断が2種類のゲノム編集の引き金となります。1つはnon-homologousend-joining（NHEJ）で2本鎖切断サイトに挿入または欠損の変異を導入します。もう1つはhomology directed repair（HDR）で、ドナーDNAを切断サイトン挿入し、遺伝子ノックインを引き起こします。

従来、HDRドナーテンプレートとしては2本鎖DNAがよく用いられてきました。しかしながら最近の研究から、1本鎖DNA（ssDNA or ssODN）がCRISPRベースの遺伝子挿入や置換、修正などに最適であることが明らかになっています。1本鎖DNAを使用することで、初代細胞や幹細胞の編集、遺伝子改変動物モデルの作製において、編集効率や正確性、オフターゲット効果などの点で大きく改善されることが示されています。

1本鎖DNAをより使いやすくするため、GenScriptは独自のアプローチで2本鎖DNAを検出できないレベルまで抑え、DNAの損傷を最小限に抑えています。配列の100％保障と収量増へのフレキシブルな対応を備えた本サービスをご利用いただければ、CRISPR遺伝子ノックインはさらに容易に行えるようになります！