サービス概要

Cellecta社のゲノムワイドなヒト/マウスプール型レンチウイルスsgRNAライブラリは標的遺伝子分野が異なる3つのModuleから構成されており、機能欠損スクリーニングにご利用いただけます。各Moduleには約6,500種類の遺伝子を標的とする約55,000種類のsgRNAが含まれています。またゲノムワイドなSingle Moduleもご用意しており、約19,000種類の遺伝子を標的とする約80,000種類のsgRNAが含まれています。各Moduleには1標的遺伝子に対して最大8種類のsgRNAが設計されています。本ライブラリはsgRNAごとに異なるバーコード配列が発現カセットに挿入されているため、スクリーニング後に次世代シーケンス解析することでノックアウトされた標的遺伝子を特定可能です。
スクリーニング実験後の細胞をご送付いただき、次世代シーケンスを行う受託サービスもご用意しております。

プール型レンチウイルス sgRNAライブラリ実験概要（fig.1）

シングルモジュールのライブラリも販売開始！ 1つのライブラリで19,000protein-coding geneをカバーしており、各遺伝子について4つのsgRNAデザイン、約80,000sgRNAがプールされております。

sgRNAライブラリの特徴

• 各標的遺伝子に対して4～8種類のsgRNA
• 全てのライブラリを合わせるとほぼ全ての遺伝子をカバー（19,000以上）
• Illumina HiSeqおよびGAIIx、NextSeqにより標的遺伝子を特定可能

CRISPR Human Genome Knockout Library	標的分野	標的遺伝子数	sgRNA数
Module 1	シグナル伝達	6,555	約55,000
Module 2	疾患関連 既知薬剤ターゲット	6,262	約55,000
Module 3	細胞表面マーカー 細胞外マトリックス DNA結合	6,184	約55,000
Single-module（80K）	ゲノムワイド	約19,000	約80,000

詳細（fig.2）

各sgRNAライブラリの標的遺伝子リストやマニュアル等は下記のリンクからダウンロードして下さい。

納品形態	sgRNA Library	標的遺伝子リスト	Product Analysis Certificate	User Manual
プラスミドライブラリ	Module 1
	Module 2
	Module 3
	Single Module (80K)
パッケージ済みウイルスフォーム	Module 1
	Module 2
	Module 3
	Single Module (80K)

本ライブラリは U6プロモーターでsgRNAを発現し、ヒトユビキチンCプロモーター下に TagRFP（Evrogen）とピューロマイシン耐性遺伝子を配置した下記ベクターを使用しております。

CRISPR Library Vector	NGS Cassette	Sequence（.txt | .dna（＊））
pRSG16-U6-sg-HTS6C-UbiC-TagRFP-2A-Puro	HTS6C-noBC	FASTA | SnapGene

＊ dnaフォーマットファイルを開くために SnapGene^® Viewerをダウンロードして下さい。

本ライブラリは広く使用されている第二、または第三世代のVSV-G偽型ウイルス粒子や、Cellecta社の第二世代のpsPAX2/pMD2.G packaging plasmid mix（Ready-to-use Packaging Plasmid Mix, 品番：CPCP-K2A, 250μg）によりパッケージすることができます。Cellecta社のパッケージ済みライブラリのタイターは293T細胞にトランスダクションし、RFP陽性細胞のFACSにより決定可能です。

sgRNAライブラリスクリーニングの次世代シーケンス解析受託サービス

本サービスは、CLT社ライブラリを使用して調製した各サンプルの凍結ペレット（細胞・組織）をご提供いただき、CLT社にてDNA抽出・増幅、次世代シークエンシングデータ取得・解析を行い、sgRNA配列のリストをご提供するものです。サンプルは、フェノール－クロロホルム耐性の15mLサイズのポリプロピレン遠心用チューブに保管し、黒色または青色のアルコール耐性マーカーで各チューブにサンプル名をご記入いただき、チューブラベルとサンプル詳細とを記載したリストと共にCLT社へドライアイス便でご発送ください。

1.	お申込書類記載
2.	CLT社へ細胞・組織ペレット（品番 CANA-SQ）、またはゲノムDNA（品番 CANA-SQD）の送付
3.	CLT社にて実験・解析作業
	各サンプルからゲノムDNAを抽出する（細胞、組織ペレットの場合） 抽出したゲノムDNA のバーコードを増幅後、ハイスループットシークエンシング調製する 各サンプルの増幅されたバーコードをシークエンス（>20x106リード） 各バーコードをsgRNA配列と照合させ、解析する （ア）各sgRNA配列の相対存在量の算出（バーコード/sgRNA数） （イ）サンプル間の差異計算（お客様より何れのサンプル間を比較するという情報をいただいた場合に限ります） 報告書を作成
4.	コスモ・バイオより報告書（電子データ）を納品