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遺伝子導入細胞の作製 ID: J01487

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各種細胞（動物、微生物）の遺伝子導入・改変に関する業務、および、細胞・組織を用いた多様な解析を受託いたします

カテゴリ

サービスについて

概要

こんな方にオススメ！

遺伝子と細胞を指定するだけで、ベクター設計もお任せで作製してもらいたい。
発現ベクターを好みの形に変更して、作製したい。
遺伝子導入の実績がない細胞で実験をしてほしい。

対応業務

遺伝子発現ベクターの設計と作製
遺伝子導入細胞、遺伝子改変細胞の作製
ウイルスベクター調製（レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス）
分子生物学的解析（リアルタイムRT-PCR、マイクロアレイ、免疫沈降、ウエスタンブロット、サザンブロット、ノザンブロット、CLIPなど）
細胞生物学的解析（免疫染色、in situ ハイブリダイゼーション、フローサイトメーター）
エピジェネティック解析（MSP、バイサルファイト・シークエンス、ChIP-PCRなど）

遺伝子導入細胞の作製試験の流れと実施項目

1.ヒアリング	専門性の高いスタッフがヒアリングし、使用目的に応じた最適な遺伝子発現細胞の作製の手順をご提案します。ベクターの設計（目的遺伝子の取得方法の選択、基本ベクターの選択）遺伝子導入法の選択導入遺伝子の発現解析法の選択
1.ヒアリング	複雑なベクター構築にも対応可能です複数遺伝子の同時発現（IRES、T2A配列等）誘導性発現系の構築（Tet誘導系等）薬剤選択遺伝子の変更プロモーターの変更タグ配列、蛍光タンパク質の付加
2.発現ベクターの構築	合成遺伝子、cDNAなどから、PCR増幅、制限酵素処理等を行い、目的遺伝子を発現するベクターを構築します。
3.細胞への発現ベクターの導入	下記のいずれかの方法で発現ベクターを導入します。至適条件の検討も実施可能です。リポフェクションエレクトロポレーションウイルス感染（レンチウイルス、レトロウイルス）
4.ベクター導入細胞の選択（細胞の樹立）	薬剤処理によりベクター導入細胞を選択します。オプションでクローンの取得を行います。
5.樹立細胞における導入遺伝子の発現解析	下記の発現解析が実施可能です。細胞の使用目的に応じて、最適な方法をご提案します。定量的RT-PCR ウエスタンブロッティングフローサイトメトリー免疫細胞化学（免疫染色）

薬剤に対する増殖能の変化、走化性の評価等の機能的解析もオプションで可能です。お気軽にご相談ください！

ウイルス粒子の調整

調製し、希釈したGFP発現アデノ随伴ウイルスをヒト腎臓細胞株へと感染（fig.1）

アデノ随伴ウイルス
アデノウイルス
レンチウイルス
レトロウイルス

fig.1 ウイルス粒子の調整

CRISPR/Cas9系を用いた遺伝子編集

Guide RNAの設計と切断能の評価
ベクターの設計と構築（レンチウイルス型、アデノ随伴ウイルス型等）
ノックアウト（ノックイン）細胞の樹立

実績

細胞	遺伝子導入法	導入遺伝子	発現系	樹立状態	発現確認
マウス繊維芽細胞	リポフェクション	ヒト遺伝子2種	テトラサイクリン誘導発現型	クローン化（20クローン）	定量的RT-PCR
マウスB細胞株	エレクトロポレーション	ヒト遺伝子2種	恒常発現型	クローン化（20クローン）	フローサイトメトリー
ヒト肝癌細胞株	レンチウイルス	shRNA75種	恒常発現型	バルク75種	定量的RT-PCR
マウスT細胞株	エレクトロポレーション	ヒト遺伝子14種	恒常発現型	バルク14種	ウエスタンブロッティング
ヒト腎臓細胞株	リポフェクション Flp-in system	マウス遺伝子4種	恒常発現型	クローン化（29クローン）	定量的RT-PCR
ヒト肝癌細胞株	リポフェクション	ヒト遺伝子12種	恒常発現型	クローン化（36クローン）	免疫細胞化学

ご注文に関して

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参考価格・納期

サービス名	参考項目	価格（税抜）	納期
遺伝子導入細胞の作製	1種類のヒト遺伝子のクローニングと発現ベクターの構築を行う。 1種類の細胞にベクターを導入し、薬剤耐性細胞をバルク状態で取得する定量的PT-PCRにより導入遺伝子の発現解析を行う	お問い合わせ＊	2～3ヶ月＊

＊クローン化（10クローン）を行う場合、別途費用、納期2～3ヶ月が追加されます。

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