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サーモフィッシャーサイエンティフィック / サーモフィッシャーサイエンティフィック ID: J00842

SelectScreenセルベースアッセイサービス ID: J00842

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核内受容体 / GPCR / シグナルトランスダクション経路に対するEC50値とIC50値を測定

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サービスについて

SelectScreen Cell-based核内受容体プロファイリングサービス

お客様の化合物サンプルをInvitrogenTM GeneBLAzerTM target-specific nuclear receptor cell lines を用いて、アゴニスト活性（EC50値測定）、アンタゴニスト活性（IC50値測定）を調べます。

β-ラクタマーゼレポーター遺伝子とFRET基質を用いた、 GeneBLAzer テクノロジーにより高いZ’値の安定した結果が得られます。
アッセイプレート毎に、既知化合物（アゴニスト）によるコントロールを取り、またアッセイモードにあわせた既知化合物（アゴニストまたはアンタゴニスト）でタイタレーション試験を行い、予測されるEC50値またはIC50値が得られているかの確認を行います。

GeneBLAzerテクノロジーを用いた核内受容体アッセイ

GeneBLAzer核内受容体アッセイは、上流にGAL4のアクチベーター配列（UAS）を持ったβ-ラクタマーゼ（bla）レポーター遺伝子を利用しています。GAL4DNA結合ドメインはターゲットとなる核内受容体のリガンド結合ドメイン（NR-LBD）との融合タンパク質として発現され、リガンドの結合によりGAL4 DBD-NR LBD融合タンパク質の核内移行が起こり、レポーター遺伝子の発現が起きます。（fig.1）

  • FRETを用いた信頼性の高い検出システム（fig.2）
    基質にはFRETを引き起こす蛍光色素標識がされており、βラクタマーゼの活性化により基質が切断されると緑色蛍光（520nm)から青色蛍光（447nm）へとシフトします。青色蛍光 / 緑色蛍光を用いた比率測定により信頼性の高いZ’値が得られます。
  • GeneBLAzer ERβ-UAS-bla GripTite 293アッセイの検証データ（fig.3）
    1. GeneBLAzer ERβアッセイにおける既知の作用薬パネルの濃度-反応曲線を示しています。これらのアゴニストの強度の順位は既知文献資料の数値と一致しています。
    2. パーシャルアゴニスト / アンタゴニスト化合物パネルの濃度-反応曲線を示しています。結果は既知文献資料の数値と一致しています。これらの化合物はERαに対してはアンタゴニストであると同時にパーシャルアゴニストですが、ERβに対してはアンタゴニストです。アンタゴニストモードについては細胞はEC50量のエストラジオール存在下において試験されています。

fig.1 GeneBLAzer 核内受容体アッセイ

fig.2 FRETを用いた信頼性の高い検出システム

fig.3 GeneBLAzer ERβ-UAS-bla GripTite 293アッセイの検証データ

SelectScreen Cell-based GPCRプロファイリングサービス

GPCRは創薬ターゲットとして最も注目されており、現在使用されている薬剤の約半数がGPCRをターゲットとしています。GPCRアゴニスト、アンタゴニストアッセイ用に調製されたcell lineを用いてお客様の化合物サンプルについて、EC50値測定、IC50値測定を行います。

βラクタマーゼレポーター遺伝子とFRET基質を用いた、 GeneBLAzer® テクノロジーにより高いZ’値の安定した結果が得られます。（fig.4）

fig.4 GeneBLAzer®テクノロジー
アッセイを確実にするコントロール
アッセイプレート毎に、既知化合物（アゴニスト）によるコントロールを取り、またアッセイモードにあわせた既知化合物（アゴニストまたはアンタゴニスト）でタイタレーション試験を行い、予測されるEC50値またはIC50値が得られているかの確認を行います。

SelectScreenTM Cell-based GPCRプロファイリングサービスには、GeneBLAzer® テクノロジー（fig.5）、TangoTM bla-reporterテクノロジー（fig.6）の2種類のサービスがございます。目的に合わせてお選びください。

fig.5 eneBLAzer®テクノロジー

fig.6 Tango™ bla-reporterテクノロジー

SelectScreen Cell-basedパスウェイプロファイリングサービス

お客様の化合物サンプルをInvitrogenTM GeneBLAzerTM cell signaling pathway-specific CellSensorTM Cell Linesを用いて、 シグナルトランスダクション経路の活性化測定、阻害活性測定を行います。

特長
GeneBLAzer cell signaling pathway-specific CellSensor Cell Linesは、 薬剤添加に伴ってシグナルトランスダクション経路が活性化されることにより、 レポーター遺伝子（βラクタマーゼ）が発現するようデザインされた細胞です。

アッセイ用細胞は化合物による受容体活性化の結果、シグナル伝達経路を介して転写因子が活性化されβラクタマーゼをレポーターとして発現するよう調製されています。発現したβラクタマーゼの働きにより、FRET基質が緑色蛍光から青色蛍光へとシフトするため、青色蛍光 / 緑色蛍光の蛍光比率により、化合物の活性効果・阻害効果を測定します。（InvitrogenTM GeneBLAzerTM） 現在38のパスウェイが利用可能です。（fig.7）

fig.7 GeneBLAzer cell signaling pathway-specific CellSensor Cell Lines

ご注文に関して

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参考価格・納期

サービス項目 価格（税抜） 納期
SelectScreen Cell-based核内受容体プロファイリングサービス お問い合わせ 3～4週間
SelectScreen Cell-based GPCRプロファイリングサービス（＊1） お問い合わせ 3週間～
SelectScreen Cell-basedパスウェイプロファイリングサービス お問い合わせ 3週間～

＊1 dividing cellsを用いる一部のアッセイでは納期が4～6週間となります。
＊　サンプルの輸出に別途1週間程度をいただきます。

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  • ※価格及び、サービスの仕様・内容などにつきまして、予告なしに変更されることがあります。
  • ※表示している参考価格は消費税等は含まれておりません。
  • ※受託サービスは、すべて研究目的として作業を行います。その他の目的（医療品・食品の製造・品質管理や医療診断など）には使用しないで下さい。
  • ※納期は参考納期です。諸事情により、前後する場合がございます。納期の詳細については個別にお問い合わせください。
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  • ※納品物によっては、その構成物（例えば、ベクター、蛍光色素など）の使用に制限がある場合があります。
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