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医化学創薬 / 医化学創薬 ID: J00443

GANP® 高親和性抗体作製 ID: J00443

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GANP® マウス技術による高親和性、高特異性の抗体取得が期待されるGANP® マウス技術によるモノクローナル抗体作製受託サービスを提供しています。

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サービスについて

概要

医化学創薬社では、高親和性、高特異性の抗体取得が期待されるGANP® マウス技術によるモノクローナル抗体作製受託サービスを提供しています。 GANP® マウスとは、抗体の可変領域により多くの変異が入りやすい遺伝的背景を持ったマウスであり、GANP® マウスを用いて抗体を作製することで、野生型マウスを用いる場合と比較すると、突然変異が多く入り親和性や特異性が高い抗体の取得が期待できます。 分子上の小さな違い（アミノ酸1残基）を識別する抗体、小さい分子（低分子化合物）を認識する抗体、中和抗体、ファミリー分子を個別認識する抗体、アミノ酸修飾を認識する抗体などの抗体作製、診断薬や抗体医薬の開発への展開などをご検討の場合、本サービスは有効です。
GANP® マウス技術による抗体作製は、バイオ系企業をはじめ大学・研究機関の研究者の方々や抗体受託メーカー、メガファーマから大変好評を得ております。
また医化学創薬社では、更に、腸骨リンパ節法による抗体作製サービスも提供しております。この方法とGANP® マウスと併用することで、従来法より短期間かつ少量の抗原で、GANP® マウスによる抗体作製を実施できます。さらにGANP® マウスと併用するサービスもご提供しています。
また、ライセンスフリーであるBALB/cマウスを用いた抗体作製も提供可能です。
抗体取得の成否は抗原に依存するため、必ずしもご希望の抗体が得られないことをあらかじめご了承ください。

特長

突然変異が多く入ることから、小さい分子（低分子化合物）あるいは分子上の違い（アミノ酸1残基）が識別可能な高い親和性と高い特異性を持つモノクローナル抗体の単離が可能（fig.1）

原理（fig.2）
GANP（GANP：Germinal Center Associated Nuclear Protein）とは、
胚中心のB細胞で発現上昇する新規核内因子として、阪口薫雄教授（熊本大学）らにより発見されました。このGANPを高発現するトランスジェニックマウス（GANP® マウス）では、通常の野生型マウスと比較して、胚中心B細胞において、抗体可変領域に多くの体細胞突然変異が誘発されます。それにより、多様性豊かな抗体産生細胞が出現し、親和性や特異性の高い抗体を得られる可能性が広がります。

fig.1 特徴

fig.2 原理
腸骨リンパ節法とは、
従来の手法（脾臓法）では複数回の免疫を行い、腫大した脾臓をB細胞の由来とし抗体産生細胞を取得します。それに対し、腸骨リンパ節法では尾根部に1回免疫を行い、B細胞の由来としてリンパ節細胞を用いる手法で、重井医学研究所により開発されました。
腸骨リンパ節法を用いると、脾臓法と比較し、少量の抗原で、かつ短期間での実施が可能です。
医化学創薬社ではGANP® マウスとの併用も可能であるため、抗体取得までのプロセスに選択肢が増えることとなります。

従来法 腸骨リンパ節法
免疫場所 皮下または腹腔 尾根部
免疫回数 3～5回
（力価により追加免疫）		 1回
免疫抗原(タンパク)必要量例
(他の抗原についてはご相談ください)		 初回（120μg）＋追加免疫分
（50μg）が必要、力価確認（10μg）		 1回分のみ（125μg）
B細胞由来 マウス脾臓 腸骨リンパ節
免疫から細胞融合までの期間 5～9週間 17日間

＊ 免疫抗原必要量は、タンパク抗原を使用した場合です。抗原の種類により異なる可能性があります。

実施例

  • 大きな分子の中のプロリン残基（1残基）の水酸化修飾を識別する抗体

    医化学創薬社で実施した新規膵がんマーカーに対する抗体作製
    水酸化プロリン修飾型α-フィブリノゲン抗体は、独立法人国立がん研究センターにて見出された新規の膵がんマーカーです。この新規膵がんマーカーに対する抗体は、既存の野生型マウスでは得られませんでしたが、医化学創薬の保有するGANP® マウスを用いることで、プロリン残基の水酸化修飾を識別する非常に特異性の高い抗体を得ることができました。（fig.3）

    水酸化プロリン修飾型α-フィブリノゲン抗体は、2009年6月に日本（特許第4319700号）にて特許が成立しております。当該特許成立に際しましては、特許庁の「スーパー早期審査請求制度」を利用し、早期権利化を図りました。
    スーパー早期審査請求制度を利用したバイオ系企業は医化学創薬社が初めてです。詳しくはコチラ
  • 低分子化合物に対する抗体の特異性

    医化学創薬社で実施した抗ジアセチルスペルミジン抗体作製
    ジアセチルスペルミジンは、ポリアミンの一種で分子量200～300、本抗体を得るため使用した抗原diacetyl spermidine（fig.4：グラフ中青色●）とは別に非常に分子量・構造の似た分子が2つN8-acetylspermidine、（N1-Acetylspermidineグラフ中の緑色●、赤色●）知られています。
    GANP® マウスを用いて得られた抗ジアセチルスペルミジン抗体は、BALB/cマウスから得られた抗体と比較しておよそ5倍の特異性が認められました。（fig.4）
  • 4-hydroxy-3-nitrophenyl acetylに対するモノクローナル抗体の親和性比較

    GANP® マウスと野生型マウス（C57BL/6）から得られるモノクローナル抗体の親和性の違いを見るために、4-hydroxy-3-nitrophenyl acetylに対するモノクローナル抗体を得ました。その結果、GANP® マウスから得られたモノクローナル抗体は野生型マウスと比較して高い親和性を示しました。

    GANPマウス（C57BL/6系統） 野生型マウス（C57BL/6系統）
    Clone 結合定数（KD） Clone 結合定数（KD）
    NP-G2-6 7.05×10-8 NP-W2-7 1.51×10-7
    NP-G2-9 3.24×10-8 NP-W1-116 1.00×10-8
    NP-G2-12 4.92×10-8 NP-W-1B9 1.24×10-8
    NP-G2-14 2.51×10-8 NP-W-2D8 2.74×10-8
    NP-G2-15 1.10×10-7    
    NP-G2-16 4.12×10-8    
    NP-G-2E4 1.57×10-9    

    Sakaguchi et al. 2005 Journal of Immunology

  • 抗HIVウイルス 抗体の親和性比較

    ヒト免疫不全ウィルス（HIV）の膜上の糖タンパク質として知られているgp120を標的としました。Gp120の一部（24アミノ酸）を人工的に合成し、KLHコンジュゲート体して免疫抗原としモノクローナル抗体を得ました。その結果、GANP® マウスからはC57BL/6系統、BALB/cマウスと比較して非常に親和性の高いモノクローナル抗体を得ることができました。

    GANPマウス（C57BL/6系統） 野生型マウス（C57BL/6系統） BALB/cマウス
    Clone 結合定数（KD） Clone 結合定数（KD） Clone
    		 結合定数（KD）
    G1-22 1.77×10-6 W1-2 9.81×10-8 B1-10 5.68×10-9
    G1-68 4.81×10-7 W1-7 3.11×10-9 B2-24 1.64×10-7
    G1-124 1.01×10-6 W1-8 7.58×10-8 B2-27 4.97×10-6
    G1-165 1.14×10-7 W1-10 1.83×10-8    
    G1-181 1.09×10-8 W1-21 9.70×10-8    
    G1-231 2.07×10-6 W1-43 8.25×10-9    
    G2-10 9.90×10-11 W1-45 5.89×10-9    
    G2-25 1.51×10-10 W1-63 5.67×10-9    
        W1-84 2.81×10-5    

    Sakaguchi et al. 2005 Journal of Immunology

    Gp120はCD4細胞に感染する時に必須なタンパク質です。GANP® マウスから得られた抗体のうち結合定数の高い2つのモノクローナル抗体は、低濃度において非常に高い中和活性を持つ事が明らかになりました。（fig.5）
    Sakaguchi et al. 2005 Journal of Immunology

fig.3 大きな分子の中のプロリン残基（1残基）の水酸化修飾を識別する抗体

fig.4 低分子化合物に対する抗体の特異性

fig.5 Gp120はCD4細胞に感染する時に必須なタンパク質です。GANP®マウスから得られた抗体のうち結合定数の高い2つのモノクローナル抗体は、低濃度において非常に高い中和活性を持つ事が明らかになりました。

ご注文に関して

お問い合わせフォーム よりお問い合わせください。

参考価格・納期

  • 脾臓法
    工程 作業内容 標準期間 価格（税抜）
    01. マウスへの免疫 3～4ヶ月 お問い合わせ
    マウス血清の力価確認
    02. 細胞融合 2ヶ月 お問い合わせ
    スクリーニング
    03. 培養上清の調製と送付 お問い合わせ
    04. クローニング 2ヶ月 お問い合わせ
    ハイブリドーマの凍結納品
    合計 7～8ヶ月 お問い合わせ
  • 腸骨リンパ節法
    工程 作業内容 標準期間 価格（税抜）
    01. マウスへの免疫 3～4ヶ月 お問い合わせ
    細胞融合
    スクリーニング
    02. 培養上清の調製と送付 お問い合わせ
    03. クローニング 2ヶ月 お問い合わせ
    ハイブリドーマの凍結納品
    合計 5～6ヶ月 お問い合わせ
  • オプション
    ウエスタンブロットでのスクリーニング お問い合わせ
    競合ELISAでのスクリーニング お問い合わせ
    他、ご希望の評価系構築 お問い合わせ
    精製抗体の調整、抗体標識など 該当ページを参照ください

関連サイト

  • ※価格及び、サービスの仕様・内容などにつきまして、予告なしに変更されることがあります。
  • ※表示している参考価格は消費税等は含まれておりません。
  • ※受託サービスは、すべて研究目的として作業を行います。その他の目的（医療品・食品の製造・品質管理や医療診断など）には使用しないで下さい。
  • ※納期は参考納期です。諸事情により、前後する場合がございます。納期の詳細については個別にお問い合わせください。
  • ※会社名・サービス名などは、各社の商標・登録商標です。
  • ※納品物によっては、その構成物（例えば、ベクター、蛍光色素など）の使用に制限がある場合があります。
  • ※ヒト臨床サンプルの場合はインフォームドコンセントを得ていることをご確認ください。 ヒト由来のサンプルの場合、ご所属の組織の倫理委員会などで承認が得られたものが受領されます。
  • ※人間への感染性が疑われるサンプルに関しては、お受けできない可能性がございます。
  • ※サンプルの保管および返却を行っていない場合があります。お客様より提供いただいたサンプルおよび解析データ等は、業務終了後、廃棄される場合がございます。

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