DNAの抽出からPremixタイプまで承ります。
| Single extension サービス | スタンダードタイプ | WEBで簡単オーダーでき、解析結果もWEBからダウンロードで取得可能です。 1シーケンス反応により解析したデータを、ご報告させていただきます。 シグマアルドリッチでご用意するユニバーサルプライマー（リストはこちら）、もしくはお客様ご提供のプライマーを使用しシーケンス反応を行い解析します。 解析塩基長は1シーケンスあたり平均500塩基程度です（サンプルの状態により異なります）。 |
| Premixタイプ | 解析をご希望のDNAとシーケンス用プライマー混合済サンプルをご提供いただき、シーケンス反応と解析をするサービスです。スタンダートタイプに比べて費用を抑えることができます。 | フラグメント解析サービス | ゲノムを鋳型として蛍光標識プライマーを用いてPCR増幅を行ったサンプルをお預かりし、キャピラリー電気泳動することによってフラグメント長を解析します。LOH解析やマイクロサテライト解析にご利用いただけます。 |
| サンプル（＊1） | 濃度/量（＊2） | 注意点 | 発送条件 |
|---|---|---|---|
| Plasmid DNA |
100ng/μL以上、 10μL以上 |
・滅菌蒸留水、TEにて濃度調整済みの物に限る。 ・GenElute™ Plasmid Miniprep Kit（又は、此れに準じる方法）での精製が必要。推奨プロトコルはこちら（PDF:1.8MB）。 ・プラスミドの種類（＊3）をお知らせ下さい。 |
冷蔵10℃以下 |
| PCR産物 （Crude） |
濃度は 右記参照、 20μL程度 |
・未精製のPCR反応済み溶液。 ・反応済み溶液 ＜5μL をアガロースゲルで電気泳動しエチジウムブロマイド染色した場合に、目的の増幅産物がはっきりとシングルバンドで確認できること（100bp～10kbのPCR産物に限る。ただし200bp以下の産物の場合は良好な解析結果が得られない場合があります）。 ・GenElute™ PCR Clean-Up Kitで精製をおこないます。 |
|
| PCR産物 （Purified） |
10ng/μL以上、 10μL以上 |
・GenElute™ PCR Clean-Up Kit （又は、此れに準じる方法）での精製が必要。推奨プロトコルは
こちら（PDF:174KB）。 ・滅菌蒸留水またはTEにて濃度調整済みの物に限る。 ・目的の増幅物がシングルバンドであること(100bp～10kbのPCR産物に限る。ただし200bp以下の産物の場合は良好な解析結果が得られない場合があります）。 |
|
| 大腸菌 （チューブ） |
－ | ・K12株由来 高コピー数プラスミド（＞10）に限る。 ・プラスミドの種類や、薬剤耐性明記ください。 ・Single clone/Tubeのご注文に限らせていただきます。 ・Glycerol stockまたはスタブアガーでの穿刺培養サンプルのみ受け付けます。 ・アガープレートの状態ではお受けいたしかねます。 |
Glycerol stock: 冷凍-20℃以下 （ドライアイス同梱ください） 穿刺培養: 冷蔵10℃以下 カルタヘナ法に順ずる。（＊4） |
| Premix | 下表参照 | Primer と鋳型DNA を混合し、全量が6μL になるように調製のうえ、ご送付ください。 【鋳型DNA の量について】 ❶ プラスミドDNA の場合：プラスミドDNA (100ng) 4μL + Primer (2.5 μ M) 2μL = 6 μL をPCR チューブに入れてください。 ❷ 精製済みPCR 産物の場合：下表に従ってDNA 量を調整した精製済みPCR 産物 4 μL + Primer (2.5 μM) 2 μL = 6 μL をPCR チューブに入れてください。 |
冷蔵10℃以下 |
| 産物長 | DNA量 |
|---|---|
| 100～200bp | 3ng |
| 201～500bp | 10ng |
| 501～1,000bp | 20ng |
| 1,000～2,000bp | 40ng |
| > 2,001bp | 50ng |
Primer と鋳型DNA を混合し、全量が6μL になるように調製のうえ、ご送付ください。
| サンプル | 液量 |
|---|---|
| Primer（2.5μM） | 2μL |
| 精製済み鋳型DNA | 4μL |
| 合計 | 6μL |
＊1 ヒト臨床サンプル取り扱いに関して
シグマアルドリッチジャパンではヒト臨床サンプルの個人情報取扱い、ならびに受託データの診断目的でのご使用に関する一切の責任を負うことはできません。個人情報に関わるサンプルは、お客様ご所属施設の倫理委員会等で遺伝子解析研究に用いられることの承認が得られており、かつお客様の元で匿名化されたものに限らせていただきます。
＊2 表中の濃度/量を作業時に確保できる状態でお送り下さい。
＊3 Thermo Fisher Scientific社のGateway® ベクターシステムをご使用の場合、シグマアルドリッチジャパンのシーケンス反応のプロトコル変更が必要となります。Gateway® ベクターをご利用の方は、ご注文画面のチェックボックスをONにしてください。この場合は、濃度500ng/μL程度のサンプルをご用意ください。その他、通常のベクターではoffで結構です。
＊4 クローン化した遺伝子の取り扱い
クローン化した遺伝子に関しましては、病原性 / 感染性 / 毒素産生性を持たないサンプルに限らせていただきます。又、カルタヘナ法（国の定める「遺伝子組み換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」）に従い、サンプルをご送付ください。以下の情報をご提供いただくことが必要です。必ず記載の上、サンプルに同封ください。
・大腸菌ホスト（名称等）
・ベクター（名称、耐性薬剤等）
・インサート配列に関する情報（生物種、遺伝子名、ゲノム or cDNAなど）
万一輸送中にチューブが破損した時にもサンプルがもれないようにビニール袋等で二重に包装して下さい。また、輸送時の外装に必ず「取り扱い注意」の表示をして下さい。
GCリッチな配列のサンプルについて
GC含量が多い場合、鋳型やシーケンス反応産物が高次構造をとり、反応や解析が困難となるケースがございます。そのため、GCリッチなサンプルの場合は、独自のプロトコルを使用いたします。おおよそですがGC％ 70％以上を目安として、該当する場合はご注文画面のチェックボックスを必ずONにして下さい。全体としてGC含量70%以下であっても配列中にGCが特に集中している、もしくは繰り返し配列が多いものなどは該当する場合がございます。
サンプル保管
解析終了後（解析終了連絡後）1週間以内に連絡をいただけない場合は破棄させて頂きます。
シーケンス用プライマーについて
| プライマー | 発送単位 | 濃度/量 | 備考 |
|---|---|---|---|
| ユニバーサルプライマー（＊） | － | － |
M13F、M13R、T7、T3、SP6、KS、SK 配列はこちら |
| カスタムプライマー | チューブ | 10μM、10μL以上 | 濃度調整済みの物に限る。プライマー名・濃度がわかるように必ずチューブに明記して下さい。 |
| タイプ | サンプル | 価格（税抜） | 再解析 | 納期 （Sample受領翌日起算＊1） |
再解析発生時の納期 |
|---|---|---|---|---|---|
| スタンダードタイプ | Plasmid DNA | ￥1,670 | 別表参照 | 2日 | 左記+2日 |
| PCR産物（Crude） ＊ 精製料金込 |
￥2,800 | 2日 | 左記+2日 | ||
| PCR産物（Purified） | ￥1,670 | 2日 | 左記+2日 | ||
| 大腸菌 | ￥2,940 | 3日 | 左記+2日 | ||
| Premixタイプ | ～8サンプル /8連チューブ |
￥8,480 (￥1,060/run~) |
2日 | ||
| ～48サンプル /96wellプレート |
￥37,440 (￥780/run~) |
2日 | |||
| ～96サンプル /96wellプレート |
￥65,280 (￥680/run~) |
2日 | |||
| Read only | シーケンス反応済みサンプル | ￥940 | 設定なし | 2日 | 設定なし |
・ Premixタイプの＊サンプル数が、8/48/96 サンプルに満たない場合も料金は変わりません。
97サンプル以上のご注文の場合、価格納期につきましてはお問い合わせください。
・多検体解析のご注文の場合、ディスカウント価格でのご提供が可能です。
・フラグメント解析サービスについてはお問合せください。
| 再解析指定 | 初期解析 （参考値 QV ＊2） |
再解析 | 価格 （通常価格（上記表）×下部数値が 再解析を行った際の価格です） |
価格例（税抜） PCR産物（Purified）の場合 |
|---|---|---|---|---|
| 不要（OFF） | QV≧1 | － | 1 | ￥1,670 |
| 不要（OFF） | QV＜0 | － | 0.5（＊3） | ￥835 |
| 要（ON） | QV≧1 | － | 1 | ￥1,670 |
| 要（ON） | QV＜0 | QD=1 | 1.5 | ￥2,505 |
| 要（ON） | QV＜0 | QD=0 | 1.5 | ￥2,505 |
＊1 日数には、土・日・祝祭日・その他シグマアルドリッチ社休業日は含めません。
サンプルのご送付は、土・日・祝祭日・その他シグマアルドリッチ社休業日着を避けてお送り下さい。
＊2 解析結果表示画面には、各シーケンス結果の品質を示す数値として、QV（Quality Value）が表示されます。
このQVは、最高が100、最低が-100となっております。初回解析がQV < 0の場合、ご希望に応じて再解析を行います。
QV算出方法の詳細はこちら
＊3 シーケンス反応済みサンプルには適用されませんので、予めご了承ください。
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※お問い合わせは完了しておりません。
