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ROSA26KIマウス作製受託 ID: J00990

Gt(ROSA)26Sor遺伝子は、Phillip Sorianoらによって、ROSAベクターを用いたジーン・トラップ法で発見された遺伝子座です。

サービスについて

概要

  1. ROSA promoterからの転写は均一ではないもののユビキタスである
  2. Gt(ROSA)26SorKOホモ接合体マウスは、表現型が認められず健康である
  3. ES細胞における相同組換え効率が高く、相同組換えES細胞クローンを樹立しやすい
このようなセーフハーバーサイトとしての特徴を持つGt(ROSA)26Sorlocusへのノックインマウス作製サービスを、各種ベクターバックボーンを用意して提供いたします。

特長

  • ユビキタスなプロモーター活性を有し、エピジェノミックな影響を受けにくい
  • 外来遺伝子の安定的な発現
  • ホモマウスでもROSA26遺伝子破壊の表現型が現れない
  • ES細胞における高い相同組換え効率

作業概要

工程 作業内容
相同組換えベクターの構築 1.デザイン案の作成
2.目的のトランスジーン配列の受領
3.デザイン案に基づき、当社ベクターと導入遺伝子を用いて相同組換えベクターを構築
相同組換えESクローンの樹立 4. ES細胞株へのエレクトロポレーション
5. 薬剤耐性ESクローンのピックアップ
6. PCRによるスクリーニング
7. PCR解析、Neoプローブによるサザンブロット解析により、相同組換えESクローンを樹立
キメラマウス作製 8.最大3クローンの相同組換えESクローンを用いて、キメラマウス作製(全てのキメラマウスがES細胞寄与率80%を下回る場合、再作業)
ヘテロマウス作製 9. 自然交配による生殖系列キメラマウスの同定(ES細胞寄与率上位4匹のキメラマウスを、野生型マウスと交配)
10. 第1世代(F1)ヘテロマウスの取得
工程 作業内容
薬剤耐性遺伝子の除去 F1ヘテロマウスとCAG-Flpマウス(あるいは、CAG-Creマウス)との交配により、薬剤耐性遺伝子を除去。さらに、野生型マウスと交配させ、Flpトランスジーン(あるいは、Creトランスジーン)を除去

オプション:スキップサービス
(キメラマウスとCAG-Flpマウスの交配により生殖系列移行と薬剤耐性遺伝子除去を同時実施)

工程 作業内容
薬剤耐性遺伝子除去
スキップサービス
  • ES細胞寄与率上位のキメラマウスとCAG-Flpマウスの自然交配の実施(*1)
  • PCR解析による薬剤耐性遺伝子が除去された第1世代(F1)マウスの同定
  • 薬剤耐性遺伝子が除去されたF1マウスと野生型マウスの自然交配の実施(*1)
  • PCR解析によるCAG-Flpトランスジーンが除去された第2世代(F2)マウスの同定
  • 8週齢までのF2ヘテロマウスの飼育

ES細胞を用いた相同組換え法での実施例(fig.1

構築した遺伝子改変用ベクターをエレクトロポレーションによりES細胞に導入します。PCRによる1次スクリーニング、詳細解析、Neoプローブによるサザンブロット解析により、相同組換えES細胞を樹立します。

樹立した相同組換えES細胞からマウス作製(fig.2

樹立した相同組換えES細胞よりマウスを作製します。計画通り遺伝子改変用ベクターが挿入されたES細胞(最大3クローン)からキメラマウスを作製します。F1マウスを作製し、相同組換えES細胞が生殖系列へ移行しているかを確認、ヘテロマウスを取得いたします。

納品

お客様のご都合に合わせて、当社からマウスを納品します。通常はF1ヘテロ接合体マウスを納品しますが、ご希望に応じてキメラマウス(F0ファウンダーマウス)・ホモ接合体マウスの納品、凍結胚・精子での納品、マウス増産後の納品も可能です。

ご注文に関して

参考価格・納期

作業工程 納期 価格(税抜)
相同組換えベクターの構築 約2ヶ月 ¥300,000
相同組換えESクローンの樹立 約3ヶ月 ¥1,000,000
キメラマウス作製 約3ヶ月 ¥700,000
ヘテロマウス作製 約3ヶ月 ¥700,000
合計 約11ヶ月 ¥2,700,000

* 納品にかかる微生物検査費、輸送費は別途必要です。


作業工程 納期 価格(税抜)
薬剤耐性遺伝子の除去 約6ヶ月 ¥900,000

* 納品にかかる微生物検査費、輸送費は別途必要です。



作業工程 納期 価格(税抜)
薬剤耐性遺伝子除去スキップサービス 約6ヶ月 ¥1,700,000

* 1ヶ月間の交配で妊娠が確認されない場合、交配ペアを変更しさらに1ヶ月交配を実施します。
* 納品にかかる微生物検査費、輸送費は別途必要です。
* CAG-Creマウスでのスキップサービスも可能です。

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