サーモフィッシャーサイエンティフィック / サーモフィッシャーサイエンティフィック ID: J00826

Gatewayクローニングサービス ID: J00826

印刷

目的に合わせた多種類の発現クローンを作製

カテゴリ

サービスについて

概要

Invitrogen^™ Gateway^™ クローニングの受託を提供しているのはInvitrogenだけ！
（＊他社に受託を発注する場合はライセンスを所有しているか確認してください。）

基本となるエントリークローンから、Gatewayクローニングシステムを用いて目的遺伝子を方向性とリーディングフレームを維持したまま目的に合わせた多種類の発現クローンを作製します。

サービス内容

エントリークローン作製
attB配列を付加した目的遺伝子のPCR産物を、Gateway BP反応によりエントリーベクター（pDONR221またはpDONR/Zeo）にクローニングし、エントリークローンを作製します。
発現クローン作製
エントリーベクターにクローニングされている目的遺伝子を、Gateway LR反応によりご指定いただいたデスティネーションベクターにクローニングし、発現クローンを作製します。

Gateway Technology

Gatewayクローニングシステム：部位特異的組換え反応をin vitroで行うことを可能にすることで、組換え配列（att配列）を組み込んだベクター間での挿入遺伝子断片の移し変えを簡便、迅速（組換え酵素：クロネースによる25℃、1時間の反応）に行えるようにしたシステム。基本となるエントリークローンから、目的に合わせた多種類の発現クローンを作製できる。（fig.1）（fig.2）

fig.1 Gateway Technology

fig.2 Gateway Technology

基本作業・期間

目的遺伝子の増幅	プライマー設計及び合成	attB配列及びご指定いただいた配列を付加したプライマーを合成し、PCRを実施します。	1週間
	PCR
クローニング	増幅産物の精製	PCR産物の精製後、ご指定いただいたエントリーベクターへGateway BP反応によりクローニングします。	2週間
	BP反応
	大腸菌形質転換	PCRまたは制限酵素処理により、得られたクローンのインサートの長さを確認します。
	インサートチェック
	組換え部位の配列確認	ベクター側からインサートの方向へ1反応ずつ（両末端）の配列解析を行い、クローニングの成否を確認します。
配列解析	インサート全長配列解析	目的の遺伝子配列と完全に一致しているかを確認します。	2週間

オプショナルサービス

発現ベクターへのクローニング	インサート全DNA配列が確認されたエントリークローンとご指定いただいたデスティネーションベクターで、Gateway LR反応を行います。	2週間
	PCRまたは制限酵素処理により、得られたクローンのインサートの長さを確認します。
	ベクター側からインサートの方向へ1反応ずつ（両末端）の配列解析を行い、クローニングの成否を確認します。

目的に合うデスティネーションベクターが存在しない場合、お手持ちのベクターをGateway対応ベクターに改変し（別料金）、お使いいただくことが可能です。（Gatewayベクターコンバージョンサービス参照）
長鎖（5kb以上）のクローニングをご希望の場合は、サーモフィッシャーサイエンティフィック独自の技術によりお受けいたしますのでお問い合わせ下さい。

ご提供いただくもの

PCR増幅用テンプレート（polyA（+）RNA、total RNA、cDNA、cDNAライブラリー、プラスミドDNA、ゲノム DNA）polyA（+）RNA、total RNAは逆転写反応し（別料金）、得られたcDNAをテンプレートとして用います。
目的遺伝子の配列情報、またはデータベースAccession No.

ご注文に関して

お問い合わせフォームよりお問い合わせください。

参考価格・納期

サービス項目	価格（税抜）	納期
Gatewayクローニングサービス	お問い合わせ	お問い合わせ

受託オンラインCommissioned Research Online株式会社薬研社 株式会社薬研社