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株式会社薬研社

ID: J00151
ID: J00151
タカラバイオ / タカラバイオ

レンチウイルスベクター作製

高効率かつ安定な遺伝子導入システム


カテゴリ
遺伝子工学 > 組換ベクター・ウイルス作製 > 各種組換えウイルスベクター作製
遺伝子工学 > 組換ベクター・ウイルス作製 > レンチウイルスベクター作製

サービスについて

特長

  • レンチウイルスベクターでは神経細胞等の非分裂細胞にも遺伝子導入可能!
  • タカラバイオ製pLVSINベクターを利用いただけます
  • 安定発現細胞作製も承ります

概要

SIN (Self inactivating) 型の高発現用CMVプロモーターを搭載したpLVSIN-CMVおよびサイレンシング耐性のあるEF-1αプロモーターを搭載したpLVSIN-EF1αを販売しています。
レンチウイルスベクター作製受託サービスでは、これらのプラスミドベクターと、タカラバイオオリジナルの一過性ウイルスベクター産生システムを用いて、目的遺伝子を搭載した高力価のレンチウイルスベクターを作製いたします。

レンチウイルスベクターを用いた遺伝子導入法は、一般的に以下の利点を持ち、動物細胞への効果的な遺伝子導入法として、多くの遺伝子導入実験に利用されています。
  1. 初代培養細胞、幹細胞、神経細胞、非分裂細胞を含むほぼ全ての哺乳類細胞に遺伝子導入できる。
  2. 安定な遺伝子導入細胞株を得ることができる。
  3. ヒト、マウスおよびラットを含む多くの動物細胞に遺伝子導入できる。
  4. 動物個体に直接遺伝子導入できる。

pLVSINベクターはHIV-1 LTR(5’LTR及び3’LTR/ΔU3)とレンチウイルスパッケージングシグナル(ψ)とともに、導入遺伝子の発現やウイルス力価、ベクター全体の機能を向上させる配列が含まれています。目的遺伝子が搭載されたレンチウイルスベクターは、標的細胞の染色体に確実に目的遺伝子を挿入できるため、長期安定遺伝子発現が期待できます。本受託サービスでは、レンチウイルスを産生するためのGag-Pol、Tat、Revおよび、Envタンパク質を発現するプラスミド(レンチウイルスパッケージングMix)と、組換えレンチウイルスゲノムmRNAを発現するレンチウイルスベクタープラスミドを宿主細胞に同時トランスフェクションすることによって一過性にレンチウイルスベクターを取得します。
細胞内で発現したgag-pol、Envタンパク質および、組換えレンチウイルスゲノムRNAがアセンブルして組換えレンチウイルス粒子が出芽します。エンベロープ遺伝子はヒトを含む広範な生物種に感染可能なVSV-G envを使用しています。トランスフェクションから48時間後の培養上清をフィルターろ過してレンチウイルスベクター液とし、小分け分注して納品いたします。

サービス内容

    レンチウイルスベクター作製
  • レンチウイルスベクターを一過性に産生、ウイルスベクターを含む培養上清をろ過
  • Lenti-X qRT-PCR Titration Kitを用いたリアルタイムPCR法によるウイルスベクター溶液中のウイルスRNAのコピー数を算出

    * タカラバイオ取扱ベクター以外を使用する場合は、別途お問い合わせください。
    * この段階でin vitroの実験にご使用いただくことができます。
    * ウイルスベクターの力価は、測定方法により異なります。また、ウイルスベクター液の組成、測定に使用する細胞や血清などの影響により、同じ方法であっても施設によって異なることがあります。ご了承ください。

  • 【オプションサービス】
    プラスミドDNA調製
  • 目的の遺伝子を挿入した発現プラスミドDNA作製
  • 挿入遺伝子のサイズ、挿入遺伝子(接続部位を含む)の塩基配列を確認
    * pLVSIN-CMV、pLVSIN-EF1α Vectorを使用します。
  • ネオマイシン耐性コロニー検出法による力価測定
  • ネオマイシン(G418)による薬剤選択後、薬剤耐性コロニーを検出し、感染力価を測定
    * ネオマイシン耐性コロニー検出法の標的細胞には、ヒトHT1080細胞を使用いたします。ウイルス力価として得られる数値は、ウイルス液1mLあたりのネオマイシン耐性コロニー形成能を示します(Neomycin colony forming unit/mL)。
  • レンチウイルスベクターによる遺伝子安定発現細胞株作製
  • レンチウイルスベクターの作製
  • 標的細胞のセットアップ、レンチウイルスベクターによる遺伝子導入
  • 薬剤耐性となった目的遺伝子導入プール細胞の調製
  • リアルタイムPCRによる目的遺伝子の発現確認
  • レンチウイルスベクターの大量調製(ご希望のスケール)
    ウイルスベクターの簡易濃縮(約100倍まで)または超遠心分離による精製(VSV-Gシュードタイプウイルス)

納品物

  • レンチウイルスベクター液 約10mL×2種類、参考タイター 107~109 copies/mL
  • 作業報告書

受入サンプル

  • プラスミドDNAの構築からの場合        プラスミドDNA    3μg以上
  • レンチウイルスベクターの作製からの場合    プラスミドDNA    50μg以上

ご注文に関して

お問い合わせフォーム よりお問い合わせください。


参考価格・納期

サービス項目 価格(税抜) 納期
レンチウイルスベクターの作製
[2種類]
各10mL(リアルタイムPCR力価測定)
各40mL(リアルタイムPCR力価測定)
¥1,500,000
¥2,050,000
8~9週間
(オプション)
プラスミドDNAの構築*
¥170,000~/件
(遺伝子長で変動)
4~7週間
(オプション)
レンチウイルスベクターによる遺伝子安定発現細胞株作製
¥1,500,000~ 12週間~

* 目的遺伝子2種としてプラスミドベクター調製が2件発生する場合、調整費用が2件になります。


関連サイト



※価格及び、サービスの仕様・内容などにつきまして、予告なしに変更されることがあります。
※表示している参考価格は消費税等は含まれておりません。
※受託サービスは、すべて研究目的として作業を行います。その他の目的(医療品・食品の製造・品質管理や医療診断など)には使用しないで下さい。
※納期は参考納期です。諸事情により、前後する場合がございます。納期の詳細については個別にお問い合わせください。
※会社名・サービス名などは、各社の商標・登録商標です。
※納品物によっては、その構成物(例えば、ベクター、蛍光色素など)の使用に制限がある場合があります。
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