カテゴリー
関連サイト
お問い合わせ
詳細検索
特殊免疫研究所 / 富士フイルム和光純薬 ID: J01059

CRISPR/Cas9による遺伝子改変動物作製 ID: J01059

印刷

哺乳培養細胞やあらゆる動物のゲノムを編集できる『CRISPR/Casシステム』で短期間の内に遺伝子変異モデル動物を作製致します。

カテゴリ

サービスについて

概要

2013年に登場した『CRISPR/Casシステム』は、哺乳培養細胞やあらゆる動物のゲノムを編集できるシステムとして、瞬く間にライフサイエンスの中心技術となりました。短期間の内に遺伝子変異モデル動物を作製できます。またこれまで作製することが非常に困難であったラット等の動物種にも利用できます。
特殊免疫研究所ではBroad InstituteよりCRISPR/Cas9システムの使用ライセンスを所得しています。

特長

  • ノックアウト/ノックイン動物作製可能
  • 塩基置換モデル動物が作成可能
  • マウスのほかラットにも対応
  • ヒトcDNAを内在性遺伝子の発現制御領域につなげるよう挿入することが可能_ヒト化モデル作製
  • ラットやマウスの受精卵を用いてレポーター遺伝子を目的の領域に挿入可能_オリジナルのレポーター動物の樹立
  • ラットやマウスの受精卵を用いてCre（またはCreERT2）を目的の領域に挿入可能_様々なCre発現動物の作製が可能
  • floxラット、マウスの迅速な作製・樹立（ご依頼者のご希望に沿ったfloxのデザインが可能）
  • 1から10kb程度のサイズの遺伝子導入が可能（10kb以上は要相談）

作製事例

  • 実施例: CRISPR/Cas9 システムを用いたROSA KIラット作製

    作業条件
    ラット系統：Long-Evans系、Wistar系、SD系、
    標的遺伝子：ROSA遺伝子座
    注入条件：Cas9mRNA/gRNA/plasmid
    遺伝型解析：PCRスクリーニング、および蛍光確認

    作業結果（fig.1、fig.2）

    fig.1 CRISPR/Cas9 システムを用いたROSA KIラット作製　作業結果

    fig.2 CRISPR/Cas9 システムを用いたROSA KIラット作製　作業結果
  • ノックインラット・マウス作製実績

    サイズ 用途 導入方法 実績
    一本鎖DNA
    ssODN    		 200bp以下 SNPsモデル
    Tagや終止codon挿入
    LoxP導入    		 マイクロインジェクション いずれも
    ◎
    エレクトロポレーション
    長鎖一本鎖DNA
    LssDNA    		 200bp～1kb前後 Cre遺伝子
    レポーター遺伝子
    エクソン    		 マイクロインジェクション 〇
    エレクトロポレーション △
    二本鎖DNA
    dsDNA    		 2kb以上 ヒトcDNA等 マイクロインジェクション ◎
    エレクトロポレーション ×

    二本鎖DNAのサイズにつきましては10bk以上となります場合は要相談とさせていただきます。


    【一塩基置換ノックインラット作製】

    実験条件
    ラット系統　Wistar系
    標的遺伝子　ROSA
    注入条件　Cas9mRNA / gRNA / ssODN　100 / 50 / 100（ng/μL）

    受精卵細胞質注入
    注入数生存数移植数産仔数
    141個131個122個35匹
    Rosa領域に点変異（EcoRV）を挿入したノックインラット（ホモ個体）のシークエンス確認結果
    シークエンスサンプル： ホモ候補のゲノムDNAをテンプレートにPCRを行い、得られたPCRプロダクトをダイレクトシークエンスした。（fig.3）

    fig.3 一塩基置換ノックインラット作製事例

    遺伝型解析　ssODNとして導入した制限酵素
    　　　　　　サイトを利用
    　　　　　 PCRスクリーニング
    実験結果　変異体取得35匹中12匹（移植胚あたりで約10％）
    　　　　　　ノックイン個体10匹（●）　そのうち2匹がホモ変異体（●）

依頼に必要な情報

  • 標的遺伝子情報
  • 動物種＆ご希望の系統
＊ ノックアウトの場合は、遺伝子破壊方法をご相談の上デザインさせていただきます。
＊ ノックインの場合は、挿入するDNAや場所をご相談の上デザインさせていただきます。

納品物

  • 取得ファウンダー個体すべて
    （系統化をご依頼された場合は、ファウンダー個体と後代個体）
  • 作業報告書
＊ 工程の一部（2と3のみ）のご依頼も可能（要相談）
＊ ファウンダー個体取得後の系統化、生産供給、系統保存等のサービスもご提供しております。

ご注文に関して

お問い合わせフォーム よりお問い合わせください。

参考価格・納期

遺伝子変異 indel & SSODN挿入 (SNPsモデル) タイプ作製
作業工程 内容 価格（税抜） 作業期間
マウス ラット
1 受精卵への注入物質の準備
gRNA、ssODN配列設計（使用系統の配列確認）
Cas9タンパク（or mRNA）の準備（切断活性試験_要相談）
Cas9タンパク（or mRNA）、gRNA、ssODNの調製		 ￥450,000 1ヶ月程度
2 Cas9、gRNA（およびssODN）導入作業
100個処理		 ￥400,000～ ￥500,000～ 1.5ヶ月程度
3 胚移植（レシピエント動物作製）から産仔離乳
胚移植
産仔の出産、7週齢まで維持、離乳およびTail Biopsy		 ￥400,000～ ￥500,000～
4 遺伝型解析
PCR、surveyor解析等による変異体検出
シークエンス解析（3検体まで）		 ￥450,000 0.5ヶ月前後
総額 ￥1,700,000～ ￥1,900,000～

・納期：3ヶ月前後（作業工程1から4まで）
・納品物：取得ファウンダー個体すべて
　（系統化をご依頼された場合は、ファウンダー個体と後代個体）
　作業報告書
＊ 工程の一部（2と3のみ）のご依頼も可能（要相談）
＊ ファウンダー個体取得後の系統化、生産供給、系統保存等のサービスもご提供しております。

遺伝子変異 ノックイン (LssDNA & dsDNA) タイプ作製
作業工程 内容 価格（税抜） 作業期間
マウス ラット
1 受精卵への注入物質の準備
gRNA、ドナーDNA配列設計（使用系統の配列確認）
Cas9タンパク（or mRNA）の準備（切断活性試験含）
Cas9タンパク（or mRNA）、gRNA、ドナーDNAの調製		 ￥600,000 1.5ヶ月程度
2 Cas9、gRNA（およびcDNA等）導入作業
200個処理		 ￥600,000～ ￥700,000～ 1.5ヶ月程度
3 胚移植（レシピエント動物作製）から産仔離乳
胚移植
産仔の出産、7週齢まで維持、離乳およびTail Biopsy		 ￥650,000～ ￥850,000～
4 遺伝型解析
PCR-RFLP解析による変異体検出
シークエンス解析（3検体まで）		 ￥550,000～ 1ヶ月以上
総額 ￥2,400,000～ ￥2,700,000～

納期：4～5ヶ月（作業工程1から4まで）

関連サイト

  • ※価格及び、サービスの仕様・内容などにつきまして、予告なしに変更されることがあります。
  • ※表示している参考価格は消費税等は含まれておりません。
  • ※受託サービスは、すべて研究目的として作業を行います。その他の目的（医療品・食品の製造・品質管理や医療診断など）には使用しないで下さい。
  • ※納期は参考納期です。諸事情により、前後する場合がございます。納期の詳細については個別にお問い合わせください。
  • ※会社名・サービス名などは、各社の商標・登録商標です。
  • ※納品物によっては、その構成物（例えば、ベクター、蛍光色素など）の使用に制限がある場合があります。
  • ※ヒト臨床サンプルの場合はインフォームドコンセントを得ていることをご確認ください。 ヒト由来のサンプルの場合、ご所属の組織の倫理委員会などで承認が得られたものが受領されます。
  • ※人間への感染性が疑われるサンプルに関しては、お受けできない可能性がございます。
  • ※サンプルの保管および返却を行っていない場合があります。お客様より提供いただいたサンプルおよび解析データ等は、業務終了後、廃棄される場合がございます。

/

お問い合わせリストへ

※お問い合わせは完了しておりません。