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自然免疫応用技研 / 富士フイルム和光純薬 ID: J01054

LPS抽出・精製受託サービス ID: J01054

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各種グラム陰性細菌からのLPS抽出・精製を行います。

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サービスについて

概要

各種グラム陰性細菌からのLPS抽出・精製を行います。ウェストファール法、トリクロロ酢酸法、フェノールクロロホルム法などにより抽出を行い、必要に応じて、さらに、DNA・RNA除去、タンパク質除去なども行ないます。 精製LPSのトリシンSDS-PAGE法による分子量の測定も可能です。

サービス内容

  • Step1:条件検討試験
    乾燥菌体の一部を用いて熱水抽出を行い、水相のLPSがどの程度回収されているかを見積ります。

    【作業内容】
    検体のうち、乾燥菌を約20mgを用いて熱水抽出液を調整し、リムルスアッセイにより水層のLPSを求めます。
    水層のLPS含量が≧1mg/g（乾燥菌体）の場合はStep2へ
    水層のLPS含量が≦1mg/g（乾燥菌体）の場合は別途協議の上、Step3へ
  • Step2:フェノール抽出
    Step1にて水相からLPSが回収できると可能性が高いと判断出来ることから、フェノール抽出により乾燥菌体から粗LPSを抽出します。

    【作業内容】
    ウエストファールらの方法によるホットフェノール・水抽出を行い、水層に移動した粗LPSを回収します。
    回収した粗LPSについてタンパク定量、核酸定量、リムルスアッセイを実施し、データをご報告いたします。
    なお、ここで抽出した粗LPSから高純度のLPSを精製する場合にはStep4へ
  • Step3:PCP法での粗LPS抽出
    Step1にて脂溶性が高いLPSの可能性があると判断できることから、脂溶性が高いLPSの抽出方法であるPCP抽出法で乾燥菌体から粗LPS抽出します。

    【作業内容】
    PCPを用いるガラヌスらの方法によりフェノール層から粗LPSを抽出します。
    回収した粗LPSについてタンパク定量、核酸定量、リムルスアッセイを実施し、データをご報告いたします。
    なお、ここで抽出した粗LPSから高純度のLPSを精製する場合にはStep5へ
  • Step4:Step2で得られた粗LPSからの高純度LPS精製

    【作業内容】
    核酸分解酵素処理、タンパク分解酵素処理を実施します。
    酵素処理溶液を限外濾過し、低分子の夾雑物を取り除き、精製LPSを作成します。
    精製したLPSを用いてタンパク定量、核酸定量、リムルスアッセイ、糖定量、TBA法、SDS-PAGEで物性測定を実施し、データをご報告いたします。
  • Step5:Step3で得られた粗LPSからの高純度LPS精製

    【作業内容】
    核酸分解酵素処理、タンパク分解酵素処理を実施します。
    酵素処理溶液を限外濾過し、低分子の夾雑物を取り除き、精製LPSを作成します。
    精製したLPSを用いてタンパク定量、核酸定量、リムルスアッセイ、糖定量、TBA法、SDS-PAGEで物性測定を実施し、データをご報告いたします。

注意事項

  • LPS抽出方法LPSは菌株によって種類が多様で、全ての種類のLPSを予め決められた一つの方法で抽出・精製することは難しいです。
    LPSの抽出方法としては、LPSの構造にO抗原を有する水溶性が高いLPSを抽出する方法としてウエストファールらのフェノール抽出があり、実施元ではこちらの方法でLPS抽出を実施しています。
    O抗原がないLPSは、ウエストファールらのフェノール抽出では水相にLPSが回収されないか、回収されても少ない可能性があります。水相に回収されなかった場合は、フェノール層からの回収を行います。
    得られた粗LPSには、LPS以外に核酸とタンパク等も含まれています。
    核酸分解酵素処理とタンパク分解酵素処理を行い、これらの夾雑物を低分子化し、限外濾過で夾雑物を除き、LPSの精製を行います。
  • 精製LPSの回収量／純度同じ抽出作業を実施しても、菌株が異なると得られるLPSの量/純度が大きく異なる場合があります。
    精製で得られたLPS標品の乾燥重量から核酸とタンパクの含量を除いた割合をLPSの純度の目安としております。
    精製度の目標としては90％以上としていますが、LPSの種類によってはこの目標値を達成できない場合があります。

お見積りに必要な情報

  • 菌種（出来るだけ詳細にご教示ください。）
  • 目標の収量
  • 可能であれば上記菌種（もしくは近縁種）を使用してLPSを精製した論文情報
    ⇒水溶性か脂溶性か判断出来ると、条件検討試験を省略できる可能性があります。

ご準備頂くサンプル

死菌体を準備ください。（容量については別途ご相談）
中性付近で加熱（100℃・30分）、フェノール溶液への懸濁等、お客様が対応できる方法でお願いします。

＊ 感染するような菌でも、不活化処理済み、処理後に不活化の確認がされている死菌であれば対応可能です。
実績としては、病原性のある菌について、回収した湿菌体にフェノールを加え、その状態でサンプルを送付して頂いたことがあります。

ご注文に関して

お問い合わせフォーム よりお問い合わせください。

参考価格・納期

サービス項目 価格（税抜） 納期
LPS抽出・精製受託サービス お問い合わせ お問い合わせ

＊ スタートの菌種や求める収量、難易度などによりスケールなど変わりますので、まずはご相談ください。

関連サイト

  • ※価格及び、サービスの仕様・内容などにつきまして、予告なしに変更されることがあります。
  • ※表示している参考価格は消費税等は含まれておりません。
  • ※受託サービスは、すべて研究目的として作業を行います。その他の目的（医療品・食品の製造・品質管理や医療診断など）には使用しないで下さい。
  • ※納期は参考納期です。諸事情により、前後する場合がございます。納期の詳細については個別にお問い合わせください。
  • ※会社名・サービス名などは、各社の商標・登録商標です。
  • ※納品物によっては、その構成物（例えば、ベクター、蛍光色素など）の使用に制限がある場合があります。
  • ※ヒト臨床サンプルの場合はインフォームドコンセントを得ていることをご確認ください。 ヒト由来のサンプルの場合、ご所属の組織の倫理委員会などで承認が得られたものが受領されます。
  • ※人間への感染性が疑われるサンプルに関しては、お受けできない可能性がございます。
  • ※サンプルの保管および返却を行っていない場合があります。お客様より提供いただいたサンプルおよび解析データ等は、業務終了後、廃棄される場合がございます。

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